ACTIVITATI

An

Etapa

Obiective

Activităţi

1.Obtinerea si caracterizarea de noi liganzi organici, chirali sau achirali, si ai unor compusi coordinativi si organometalici cu actiune biologica potentiala.

1.1.Sinteza unor compusi organici chirali si achirali si a unor combinatii organometalice si coordinative prin metode conventionale si neconventionale (ecologice). Participa partener P1+P3

 1.2.Caracterizarea fizico-chimica prin metode specifice (RMN, SM, IR, RX, analiza elementala, etc) a derivatilor obtinuti, atat la temperatura ambianta cat si la temperaturi scazute. Participa partener P3.

1.3. Determinarea mecanismelor de reactie. Participa partener P1+P2+P3

1.4. Caracterizarea electrochimica a unor noi derivaţi cu proprietăţi de recunoaştere ionică sau moleculara. Participa P4

2010

ETAPA UNICA

2. Aplicarea chimiei computationale in modelarea compusilor biologic activi precum si stabilirea conditiilor si legilor de propagare controlata a elementelor active in mediul biologic.

2.1. Screening molecular al proprietatilor liganzilor si combinatiilor coordinative ale acestora. Optimizarea prin metode ab initio/DFT a combinatiilor model.

Participa P2.

2.2. Definirea ipotezelor si conditiilor initiale privind propagarea/transferul elementului activ in 
mediu biologic si initierea unui model matematic privind transferul si propagarea sistemelor active. 
Se vor lua in considerare proprietatile specifice ale sistemelor chimice obtinute. Participa P9

3.Studiul reactivitatii de tip stres oxidativ si nitrozativ.

3.1. Studiul interactiunii unui set initial de compusi cu activitate biologica, reprezentativi pentru clasele abordate in cadrul proiectului, cu potentiale tinte celulare: hemoglobina, mioglobina stabilirea unei platforme de testare pentru compusii nou-sintetizati in cadrul proiectului. Participa P5.

3.2. Elaborarea de protocoale pentru fractionarea extractelor celulare. Participa P5.

4. Studiul citotoxicitatii substantelor nou sintetizate: identificarea celor care au potential antiproliferativ si antimitotic

4.1. Elaborarea protocoalelor de lucru si realizarea culturilor celulare necesare pentru modelele de studiu. Tratarea liniilor cu substantele sintetizate. Participa P6

4.2. Realizarea de teste de viabilitate celulara cu metode colorimetrice, spectrometrice si pe microplaci de fluorescenta; determinarea valorilor EC50 si EC90.

Compararea efectului substantelor metalice cu citostaticele consacrate. Participa P6

5. Identificarea substantelor a caror capacitate antiproliferativa are  efect sinergic cu iradierea

5.1. Urmarirea efectul sinergic al tratamentului cu metale cu iradierea in scop terapeutic cu tehnicile de spectrometrie, ELISA, teste de viabilitate celulara. Participa P7

5.2. Iradierea probelor biologice prelucrate de P6 cu ajutorul surselor de cobaltoterapie. Tehnici de citotoxicitate si genotoxicitate in vederea elucidarii efectelor iradierii. Participa P7

6. Studii in vitro asupra activitatilor pro/anti oxidative ale compusilor nou sintetizati

6.1. Studiul interactiunii dintre compusi reprezentativi pentru clasele-tinta ale proiectului  si sisteme model de acizi nucleici, citocromi si enzime. Examinarea efectelor pro-sau antioxidative prin metode cinetice si spectroscopice. Participa P5.

6.2. Studii asupra radicalilor liberi indusi si sau/modulati de compusii-tinta. Participa P5.

7. Studiul efectelor in vitro si ex vivo a substantelor nou sintetizate: identificarea celor care induc apoptoza

7.1. Realizarea culturilor de celule normale si tumorale, tratamentul acestora cu substantele pe baza de metale. Partener P6

7.2. Procesarea probelor biologice provenite de la pacienti si stocarea acestora sub forma de banca de tesuturi. Separarea in gradient de densitate a fluidelor biologice.  Partener P6

7.3. Efectuarea testelor de citotoxicitate si apoptoza cu coloratii specifice, stabilirea indicelui terapeutic al substantel precum si apoptoza cu coloratii specifice, stabilirea indicelui terapeutic al substantelor. Efectuarea testelor de chimiosensibilitate fata de metale a probelor recoltate de la pacienti. Partener P6

8. Identificarea fenomenelor la nivel de genom si efectul regulator asupra biosintezei ca urmare a aplicarii compusilor metalici nou sintetizati pe sistemele biologice

8.1. Extractia ADN, ARN din celula tratata. Participarea la cursuri de specializare si diseminarea rezultatelor partiale obtinute. Partener P6

8.2. Evaluarea modificarilor la nivel de genom in urma aplicarii tehnicilor de amplificare, vizualizare a moleculelor implicate Partener P6.

9. Identificarea in continuare a substantelor a caror capacitate antiproliferativa are  efect sinergic cu iradierea

9.1. Studii de comparare si corelare a efectelor chemosensibilizatoare a substantelor metalice nou sintetizate si neoadjuvante consacrate. Participa P7

10. Realizarea  pe parcursul primului an a biobazei necesare efectuarii experientelor in vivo

10.2 Selectarea si dezvoltarea biobazei necesare testarii in vivo a combinatiilor chimice. Participa P8

11. Realizarea managementului cercetarii si diseminarea rezultalelor.

11.1. Centralizarea rezultatelor stiintifice obtinute in cadrul unei mese rotunde/

workshop cu toti partenerii implicati in actiune.

11.2. Elaborarea unor manuscrise care sa contina rezultatele cercetarii. Diseminarea unei parti din
rezultate la conferinte si congrese din sfera tematica abordata (nationale si internationale) si 
de interes din domeniul chimiei, biochimiei, modelarii moleculare/ matematice si aplicatiilor 
acestora in medicina care vor fi anuntate intre timpParticipa P1-P9. 11.3.Realizarea unor stagii de 
cercetare la colaboratorii din Toulouse-Franta /Leiptzig-Germania in scopul definitivarii unor 
activitati specifice proiectului.

12. Achizitionare echipamentelor / materialelor si consumabilelor necesare realizarii etapei de activitati finale 2010

Chimicale si sticlaria specifica, solventii si gazele ce intra in procesul de sinteza si analiza, plata taxei de acces la bazele de date existente in unitate (CDCC, SciFinder, Beilstein, Karlsruhe, etc). Intretinerea infrastructurii existente (Lab RMN, RX, Nod de calcul) Participa P1+P2+P3+P4+P5

Vana de injecţie, Lămpi AAS, Piese ICP-MS (Nebulizator, conuri), Etaloane ICP&AAS, electrozi, membrane schimbătoare de ioni etc. Participa P4

Licente anuale pentru softurile de modelare (Gaussian, Games, Cerius, Spartan, Maple,  Comsol Multiphis. ,etc) Statii de calcul, programe analitice si numerice, periferice, si upgrade-uri si up-date pentru statiile de calcul/interfata existente. Intretinerea echipamentelor de calcul. Participa P2 +P9.

Consumabile/accesorii cromatografie si spectroscopie UV-vis, RES, RMN, chimicale specifice, tehnica de calcule pentru prelucrarea si analiza datelor. Participa P5.

Consumabile si reactivi pentru culturi de celule, kituri de apoptoza, kituri de bioluminiscenta, anticorpi monoclonali si accesorii de separare. Achizitionare de separator magnetic si kituri de separare, coloane de separare, anticorpi marcati si nemarcati fluorescent, medii de cultura, reactivi si consumabile de laborator. Achizitionarea kiturilor de apoptoza a mediilor de cultura si suplimentilor nutritivi pentru celule, Up-gradare centrifuga. Achizitionarea unui sistem termociclu PCR monobloc, multibloc, microcentrifuga pentru tuburi eppendorf, sistem de achizitii a imaginii in UV, transiluminator si a kiturilor pentru tehnica PCR si de electroforeza verticala, standarde de referinta pentru tehnicile moleculare, anticorpi marcati fluorescent. Soft de analiza si reactivi. Participa P6

Tehnica de calcul, soft de analiza, reactivi pentru propagarea culturilor celulare, anticorpi moleculari, enzime de restrictie, kituri de citometrie in fluorescenta, kit de extractie ARN. Participa P7

Coloane de uscare/purificare si linii de transfer de solventi pentru SPS MB, reabilitarea niselor de laborator, intretinerea echipamentelor de lucru in  atmosfera controlata; reactivi chimici, solventi deuterati si organici, materiale de laborator, incinte pentru manipularea substantelor sensibile (glove bag), agitatoare magnetice si mecanice, sonde pentru controlul temperaturii, sticlarie de laborator, reactoare teflonate de tip PAAR pentru lucrul in camp de microunde si pentru sintezele hidrotermale, vase Dewar. Participa P1+P3

Sisteme de detectare selectiva a oxigenului si monoxidului de azot. Participa P1-P5

Linii celulare umane si murine, medii de cultura si reactivi specifici pentru determinari, nisa laminara, unitate de prelucrare si stocare de date, programe specifice de prelucrare de date, laptop, imprimanta color, antivirus, linii celulare, reactivi si medii de cultura, kituri de citometrie statica si in flux, kituri pentru determinari de biologie celulara si moleculara cu tehnica PCR si real time PCR. Cheltuieli pentru intretinerea bazei materiale si servicii la terti, filtru Hepa pt nise in flux laminar. Participa P6

Reactivi si kituri pentru protocoalele in vitro, piese de schimb pentru pipete automate, consumabile si reactivi pentru procesarea tesuturilor si fluidelor biologice si pentru protocoalele de radiosensibilitate, cheltuieli pentru intretinerea bazei materiale si servicii la terti. Participa P7

Custi dotate cu adapator si hranitor, achizitionare talaj steril, achizitionare animale, achizitionare furaj tipizat, achizitionare instalatie iluminare cu temporizator, achizitionare aparat special pt  mentinere constanta a umiditatii si temperaturii din incapere, modernizarea incaperii biobazei, achizitionare instrumentar de laborator – trusa disectie, masa disectie, ace, siringi, vacutainere, achizitonare aparatura de anestezie, achizitionare combina si lada frigorifica fixa si portabila, achizitionare distilator si balanta analitica. Participa P8

Materiale si consumabile specifice proiectului, inclusiv birotica, papetarie, imprimare de postere sau altele specifice proiectului. P1-P9

An

Etapa

Obiective¹

Activităţi¹

2011

Unica

I.1.Obtinerea unor derivati organometalici cu diverse clase de liganzi de interes

Obtinerea unor derivati heteropolitopici. Participa P1

Studiul reactivitatii derivatilor sintetizati in diferite medii. Participa P1

I.2.Obtinerea unor derivati coordinativi care sa contina un metal cu potentiala activitate biologica

Obtinerea unor derivati coordinativi cu metale rare. Participa P1

Studiul interactiunii cu moleculele biologice prin diverse mecanisme cum ar fi coordinarea metalelor (cu sau fara contributia ligandului), eliberare de oxid de azot etc. Participa P1+P3+P5

I.3.Caracterizarea structurala a combinatiilor chimice obtinute.

Caracterizarea fizico-chimica in solutie, prin metode specific (RMN multinuclear, IR, UV-VIS, etc). Participa P3

Caracterizarea derivatilor obtinuti in stare solida, inclusive determinarea structurii molecular prin difractie de raze X pe monocristal. Participa P3

I.4. Aplicarea chimiei computationale modelarea structurii şi a comportamentului compusilor biologic activi ai metalelor in conditii apropiate de cele din organismul viu

Optimizari ale structurilor combinatiilor cu diferiti liganzi reali in vederea.Aplicarea diverselor modele de solvent. Participa P2.

I.5. Conceperea si dezvoltarea de modele analitice care sa redea cat mai fidel fenomenul de transfer controlat al componentului activ in mediul biologic

Stabilirea legilor si conditiilor initiale pentru dezvoltarea modelului analitic. Participa P9

Stabilirea ecuatiilor matematice si conceperea modelului analitic. Participa P9

I.6. Marirea biocompatibilitatii

Fixarea de liganzi pe unitati peptidice pentru facilitarea transportului spre tinta, respectiv fixarea pe materiale care sa asigure eliberarea treptata a componentelor active si asigurarea unei concentratii controlate a acestora. Participa P5.

I.7. Studiul genotoxicitatii substantelor nou sintetizate

Cultivarea celulelor normale, tumorale si rezistente la actiunea metalelor, procesarea tesuturilor si fluidelor biologice. Participa P6

Separare imunomagnetica a celulelor si urmarirea efectului substantelor asupra raspunsului imun, in special asupra subpopulatiilor limfocitare. Efectuarea de tehnici de marcare in imunofluorescnta. Dezvoltarea cunostintelor la curs ESTRO “Combined drug-radiation treatment: biological basis, current applications and perspectives” (locatie si data neprecizate inca). Participa P6

Urmarirea gradului de lezare si a capacitatii de reparare ADN. Efectuarea testelor de genotoxicitate cu ajutorul electroforezei orizontale si evaluarii fluorescentei cu microscopia in fluorescenta. Participa P6

I.8. Studiul bazelor moleculare ale rezistentei la antineoplasticele pe baza de metale de interes biologic

Studiul mecanismelor moleculare la liniile celulare tratate „in vitro” cu medicamente platinice, cu ajutorul tehnicilor PCR . Participa P7

1.2 Studiul „ex vivo” al culturilor primare provenite din tesuturi si fluide biologice, tratate cu medicamente pe baza de platina. Participa P7.

I.9. Testarea substantelor in vitro 
si analizarea rezultatelor.

Administrarea substantelor sintetizate si testate anterior in vitro. Participa P8

Efectuarea de analize in laboratoare acreditate. Participa P8

Studii cronobiochimice. Centralizarea rezultatelor si prelucrarea statistica a acestora. Participa P8

I.10. Diseminarea rezultatelor 

Analiza rezultatelor si pregatirea manuscriselor in vederea publicarii lor in reviste ISI/BDI.

Participa toti partenerii

Participarea la manifestari stiintifice prestigioase din domeniile de interes a temei de cercetare cum ar fi:

24th International Conference on Organometallic Chemistry ICOMC, Taipei, Taiwan, 2010, ICCMB 2010-International Conference on Cellular and Molcular Bioengeenering, Penang, Malayesia, 24-26 febr,Conference on Experimental Biology (EB)

24-28 aprilie 2010,Anaheim, USA , American Society of Breast Surgeons, 11-th annual meeting, aprilie 2010
, Bellagio, USA.

De asemenea se are in vedere participarea la alte conferinte de prestigiu din domeniul chimiei, biochimiei, chimiei computationale si modelarii matematice precum si aplicatiile acestora in medicina si biologie, medicinei, etc a caror data si locatie nu a fost inca precizata. Participa toti partenerii

I.11.Achizitionare echipamentelor
 / materialelor si consumabilelor 
necesare realizarii etapei de 
activitati intermediare 2011

Contributii la intretinere/upgradare unui sistem de obtinere a azotului lichid, contributii la achizitionare/up-grade RMN, contributii la achizitionarea coloanelor de purificat solvent, contributii la abonamentele anuale la bazele de date existente in unitate. Achizitionarea chimicalelor, sticlariei, solventilor si materialelor de laborator necesare. Achizitionarea reactivilor ce contin metale rale. Achizitionarea unor carti de specialitate de interes pentru tema proiectului. Participa P1

Achizitionarea unor gaze ca: heliu, argon, hidrohem, azot lichid, UP-GRADE si intretinere pentru aparatele de analiza (SM, analizor elemental, RMN, IR, Spectometru RX, etc), liofilizator, Flash cromatograf automat, . Participa P3

Licente anuale sau achizitionarea unor surse ale programelor de calcul MO specifice (CERIUS, GAUSSIAN, SPARTAN, GAMES, NBO, etc) si a unor licente anuale/programe de calcul analitic si numeric (COMSOL MULTIPHISISC, MAPLE 12, SAMCEF). Achizitionare de piese de schimb si UP-GRADE pentru nodul de calcul existent. Achizitionarea de periferice si consumabile (papetarie , birotica) precum si carti de specialitate care vor aparea in domeniu. Tiparire de postere. Participa P2+P9

Completarea bazei materiale prin achizitionarea de consumabile/accesorii cromatografie si spectroscopie UV-vis, RES, RMN, chimicale specifice. Participa P5.

Tehnica de calcul (laptop, imprimanta multifunctionala), medii, reactivi, kituri de bioluminiscenta, kituri ELISA, incubator cu program de autosterilizare, sistem de electroforeza, reactivi specifici testelor de genotoxicitate, kituri pentru separarea imunomagnetica, medii si reactivi specifici, medii de cultura si suplementi, kituri pentru testele de genotoxicitate.  Participa P6

Echipament de achizitie de imagini, sistem de transiluminare UV, minicentrifuga de masa, cooler pentru tuburi tip eppendorf, anticorpi monoclonali stimulanti si izotipuri, kituri PCR, de expresie de gene, citokine, factori de transcriptie si semnalizare celulara, consumabile si reactivi specifici pentru procesarea culturilor, kituri de extractie ARN,kit reverse transcriptie. Participa P7

Materiale si echipamente specifice experimentelor in vivo, substante chimice, consumabile, materiale necesare pentru intretinerea bio-bazei. Participa P8

Finală an

II.1. Studii de chimie organometalica si coordinativa a

metalelor in conditii relevante biologic

Obtinerea unor noi compusi din clasele cele mai reprezentative pentru activitatea biologica. Participa P1

Stabilirea protocoalelor generale de obtinere a compusilor relevanti din punct de vedere biologic. Participa P1

Sintetiza unor peptide si fixarea liganzilor pe acestea P1+P5

Caracterizarea electrochimică a noilor compuşi coordinativi si organometalici prin tehnici electrochimice moderne. Participa P4

Efectuarea de analize ICP-MS pentru stabilirea compoziţiei elementale a noilor compuşi coordinativi si organometalici precum şi a probelor biologice tratate cu acesti compuşi P4

Realizarea unor studii fizico-chimice in vederea determinarii structurii combinatiilor obtinute. Participa P3

II.2.Studiul relatiei structura-activitate pentru clasele de

compusi care prezinta activitate biologica.

Determinarea mecanismelor reactiilor de formare a compusilor coordinative si organometalici. Participa P1+P2+P3+P4+P5.

Stabilirea reactivitatii claselor de compusi obtinute si a modului de actiune in mediu biologic.Participa P3+P4+P5

Realizarea de studii fizico-chimice (de exemplu, RMN la temperatura variabila) pentru determinarea mecanismelor de formare si actiune a compusilor chimici obtinuti. Participa P3.

II.3. Studiul prin modele a comportamentului elementului activ in ambianta asemanatoare cu cea din organismul viu.

Calcule in faza lichida cu modele continue de solvent respectiv cu solvent explicit luat in considerare pentru a evalua efectul ambiantei asupra structurii moleculare.Partener P2.

Calculele vor fi efectuate utilizand metode ONIOM (in faza lichida) in doua-trei straturi - incluzand DFT pentru partea activa si metode semiempirice/mecanica moleculara pentru straturile urmatoare. Participa P2

Efectuarea unor studii de caz pe sisteme concrete in vederea validarii modelului analitic privind transferul controlat al componentului activ in mediul biologic. Se tine cont de caracteristicile fizico-chimice ale compuslui cu activitate biologica si ale mediului de difuzie. Participa P9

II.4. Urmarirea mecanismelor moleculare de actiune ale compusilor cu activitate biologica eficienta

Stabilirea de paralele intre activitati biologice masurate si efecte cuantificabile asupra extractelor celulare si biomolelculelor izolate, pentru identificare mecanismelor de actiune la nivel molecular. Participa P5.

II.5. Identificarea fenomenelor la nivel molecular legate de mecanismele de reparere a leziunilor aparute in urma tratamentului cu metale 

Tratarea liniilor celulare si a suspensiilor unicelulare cu substantele metalice. Participa P6.

Studiul mecanismelor moleculare ale repararii, a genelor implicate in apoptoza si reparare, si efectul regulator cu ajutorul tehnicilor moleculare. Participa P6.

Pregatirea probelor in vederea determinarilor formarii de aducti metal-ADN sau metal-proteina cu ajutorul spectrometriei de masa. Participa P6.

II.6. Studiul mecanismelor moleculare ale raspunsului imun medicamentele consacrate pe baza de platina( pct8)

Studiul raspunsului imun la tratamentul chimioterapic cu platina, folosind tehnologia Luminex. Participarea la a 5-a editie a  Schimbului de experienta cu Universitatea din Perugia, Italia. Participa P7.

Corelarea efectelor medicamentelor consacrate cu raspunsul imun provocat de substantele nou sintetizate, folosind tehnologia Luminex. Participa P7.

II.7.Testarea substantelor 
in vitro si analizarea rezultatelor.

Administrarea substantelor sintetizate si testate anterior in vitro. Participa P8

Efectuarea de analize in laboratoare acreditate. Participa P8

Studii de cronobiochimie. Centralizarea rezultatelor si prelucrarea statistica a acestora. Participa P8

II.8.Diseminarea rezultatelor 
obtinute

Centralizarea rezultatelor stiintifice obtinute. Analiza compatibilitatii intre rezultatele obtinute. Participa toti partenerii.

Realizarea unei mese rotunde cu toti partenerii implicati in actiune. Se prevede achizitionarea de consumabile,  imprimarea de  postere, chirie sala, protocol si altele specifice tipului de activitate. Participa toti partenerii.

Participarea la congrese si conferinte internationale de prestigiu in domeniul temei de cercetare. De exemplu Diseminarea rezultatelor la a 39-a Conferinta de Chimie Coordinativa (ICCC39), 25-30 iulie 2010, Adelaide, Australia, Participarea la Intercongress Meeting of the European Society of Pathology, Krakowia, Polonia, septembrie 2010, 3^rd EuCheMS Chemistry Congress, Nurenberg, Germania, 21 august-2 septembrie 2010, Conference on Translational Research and Pre-Clinical Strategies in Radiation Oncology – ICTR (locatie si data inca neprecizate).

Se are in vedere participarea la cele mai reprezentative manifestari pe domeniul de interes a caror data si locatie nu este precizata la acest moment. Participa toti partenerii.

II.9.Achizitionarea echipamentelor
 / materialelor si consumabilelor 
necesare realizarii etapei de 
activitati finale 2011

Achizitionarea chimicalelor, sticlariei, materialelor de laborator necesare realizarii etapei. Up-gradarea si mentinerea in functiune a aparaturii de laborator. Achizitionarea unor carti de specialitate si contribuirea la plata taxelor de acces la baze de date importante CDCC, SciFinder, Beilstein, si alte baze de date. Participa P1+P3

Lampi AAS, Piese ICP-MS (Nebulizator, conuri), Etaloane ICP&AAS, Gaze ultrapure, Reactivi, Consumabile birou (papetărie, tonere, etc.), consumabile laborator (sticlărie, materiale electrodice, electrozi, membrane schimbătoare de ioni etc.). Participa P4.

Up-grade/achizitie statii de calcul, plata taxele de licenta anuala pentru programele utilizate si se vor achizitiona altele noi cu performante marite daca este necesar. Se achizitioneaza materialele/ consumabile necesare realizarii obiectivului. Participa P2+P9.

Completarea bazei materiale prin achizitionarea de consumabile/accesorii cromatografie si spectroscopie UV-vis, RES, RMN, chimicale specifice. Participa P5.

Achizitionarea de kit de interferenta ARN, kit de clonare si tip ECL pentru western blot, coloane si filtre de separare, kituri de PCR, linii celulare, anticorpi marcati fluorescent, medii si consumabile. Achizitionarea de kituri de separare celulara, dezagregare si extractie.Participa P6

Achizitionarea de anticorpi monoclomali, kituri ELISA, consumabile si reactivi specifici sistemului Luminex. Achizitionarea de kituri si accesorii compatibile cu sistemul Luminex, anticorpi marcati, citokine, medii de cultura si reactivi, separator magnetic pentru celule, kituri de separare magnetica. Participa P7.

Achizitionarea de substante chimice, consumabile, materiale necesare pentru intretinerea bio-bazei. Participa P8

An

Etapa

Obiective

Activităţi

2012

Unica

I.1.Fixarea componentei active pe  unitati peptidice sau materiale capabile sa faciliteze transportul si eliberarea ei treptata.

Fixarea componentei active pe  unitati peptidice  pentru facilitarea transportului spre tinta. Participa P1

Fixarea pe materiale care sa asigure eliberarea treptata a componentelor active si asigurarea unei concentratii controlate a acestora. Participa P1

Reluarea unor sinteze de combinatii organometalice si coordinative daca este cazul. Participa P1

I.2.Caracterizarea sistemelor obtinute si realizarea unor studii asupra comportarii metalelor in conditii relevante biologic

Caracterizarea sistemelor component activ/substrat din punct de vedere fizico-chimic prin metodele uzuale. Participa P3

Studiul mecanismelor de interactiune a metalelor cu substratului transportator. Participa P3

Studiul mecanismelor de actiune a metalelor asupra mediului biologic utilizat. Participa P3

I.3.Studiul computational al fixarii componentei active pe materiale suport

Modelarea preliminara a suprafetei materialelor suport la diverse nivele de calcul (MM, semiempiric, ab initio, etc). Participa P2

Studiul modului de legare a componentei biologic active. Partener P2

I.4.Studiul prin modele numerice a  transferului componentei active in mediu biologic.

Definirea modelului CAD. Participa P9

Stabilirea conditiilor la limita si a legilor care stau la baza fenomenelor fizice implicate. Participa P9

I.5.Stabilirea unor modele conceptuale pentru mecanismele de actiune ale substantelor nou sintetizate, pe baza fractionarii si analizei spectroscopice/ICP-MS

Examinarea reactivitatii redox a metalocomplecsilor in conditii relevante biologic, cu accent pe stresul nitrozativ si oxidativ. articipa P5

Fractionarea si analiza, inclusiv ICP-MS, a extractelor celulare tratate cu compusii metalici nou-sintetizati care prezinta diverse grade de activitate biologica, pentru identificarea si diferentierea importantei tintelor la nivel celular. Participa P5

Analiza ţesuturilor, culturilor si extractelor celulare. Participa P4

Analize elementale ale fractiilor celulare prin tehnicile ICP-MS şi AAS. Participa P4

Analize elementale prin tehnicile ICP-MS şi AAS ale metalelor şi ale aducţiilor de metal înglobaţi în celule biologice. Participa P4

I.6.Identificarea fenomenelor moleculare, ca urmare a inducerii apoptozei la celulele tratate cu metale

Modularea nivelului speciilor proteice si expresiei genelor implicate in apoptoza declansata de compusii metalici, cu ajutorul tehnicilor PCR, si de electroforeza verticala. Participa P6.

Studiul modularii genelor si speciilor proteice implicate in rezistenta multipla la medicamente. Participa P6.

I.7.Studiul supraexprimarii speciilor reactive de oxigen datorita introducerii substantelor cu continut de metal in celula sau in spatiul intracelular

Studiul stresului oxidativ provocat de substantele nou sintetizate. Participa P6.

Urmarirea influentei reciproce a metalelor asupra generarii speciilor reactive de oxigen (ROS) si a monoxidului de azot (NO) si efectele feed-back in acest caz folosind tehnica western blot si citirea cu analizor de densitometrie optica. Participa P6.

I.8.Elaborarea de markeri  de radio-chimioterapie specifici in vederea personalizarii chimioterapiei cu medicamante pe baza de metale

1.1. Corelarea datelor privind chimiosensibilitatea in vitro, obtinute de P6 cu rezultatele tratamentului oncologic. Participa P7.

I.9.Studii cronobiologice asupra substantelor biologic active fixate pe suport

Administrare substante sintetizate in vivo Participa P8.

Urmarirea activitatii biologice a substantelor administrate subiectilor. Participa P8

Efectuarea analizelor de specialitate. Participa P8

Centralizare rezultate. Prelucrarea statistica a datelor. Participa P8

I.10.Diseminarea rezultatelor

Centralizarea rezultatelor stiintifice obtinute. Analiza compatibilitatii intre rezultatele obtinute. Pregatirea manuscriselor Participa toti partenerii.

Participarea la congrese si conferinte internationale de prestigiu in domeniul temei de cercetare. De exemplu:

Participarea la al 15-lea  Congress of the European Society for Organ Transplantation, Glasgow, Anglia, 4-7. septembrie 2011 si la 2011ASCO Meeting- conferinta anuala a American Society of Clinical oncology- locatia neprecizata, Participarea la International Congress on Anti Cancer Treatment ICACT 22 ,Paris, Franta, data neprecizata, si la Al 4-lea Simpozion de Biologia Oxigenului si Medicina, aprilie, Paris, Franta. Diseminarea cunostintelor la Conference on Experimental Biology (EB) 9-13 aprilie 2011,Washington, USA, participarea la 5th International Conference on Oxidative Stress in Skin Medicine and Biology,8-11, 2011, Andros, Grecia Participarea la 16th Congress of the European Hemathology Association, 9-12 iunie 2011, Londra, Anglia si la European Cancer Conference- data si locul inca neprecizate.

Se are in vedere participarea si la alte manifestari stiintifice reprezentative in domeniul temei propuse (pana in acest moment nu se cunoaste data si locul exact pentru toate).

Participa toti partenerii.

I.11.Achizitionarea echipamentelor / materialelor si consumabilelor necesare realizarii etapei de activitati intermediare 2012

Partener P1: achizitionarea chimicalelor, sticlariei si materialelor de laborator, a solventilor organici uzuali si deuterati, obiecte de papetarie si birotica, piese de schimb pentru aparatura de laborator si materiale de intretinere a acestora.

Partener P3: achizitionarea solventilor organici uzuali si deuterati, obiectelor de papetarie si birotica, pieselor de schimb pentru aparatura de laborator si a materialelor de intretinere a acestora (de exemplu heliu, azot lichid, etc).

Partener P2: achizitionarea licentelor anuale/programe pentru softurile specializate, piese de schimb/intretinere tehnica de calcul.

Partener P5: achizitionarea de consumabile/accesorii pentru cromatografie, spectroscopie UV-vis si RES, analize ICP-MS, tehnica de calcul/analiza

Partener P6: achizitionarea de accesorii de spectrometrie si citometrie, kituri de evaluare ROS, reactivi si medii de cultura, aparat dezagregare celule, tehnica de calcul (calculator), soft de analiza, medii, linii celulare, consumabile laborator, accesorii baie de apa, sistem de transiluminare cu cititor in UV, reactivi accesorii pentru congelator si pentru rezervor azot lichid, enzime de restrictie, ligaze.

Partener P7: achizitionarea de agitator magnetic, baie de apa, reactivi, kituri si accesorii de citometrie, anticorpi, enzime de restrictie, ligaze, kit de RNA interference, kit de clonare Topo F'10, kit ECL pentru western blot anticorpi si consumabile pt. western blot.

Partener P8: achizitionarea materialelor necesare pentru intretinerea biobazei si a materialelor consumabile (birotica, papetarie).

Partener P9: Achizitionarea licentelor anuale pentru programele de calcul specifice si a componentelor pentru statiile de calcul, achizitionarea de carti, consumabile necesare (papetarie, birotica, etc).

Partener P4: Lămpi AAS, Piese ICP-MS (Nebulizator, conuri), Etaloane ICP&AAS, Gaze ultrapure, Reactivi, Consumabile birou (papetărie, tonere, etc.), consumabile laborator (sticlărie, materiale electrodice, electrozi, membrane schimbătoare de ioni etc.)

II.1.Fixarea si transportul componentei active pe  unitati peptidice  sau materiale capabile sa faciliteze propagarea si eliberarea treptata a agentului activ in mediul biologic. Acest obiectiv este general pentru anul 2011.

Fixarea componentei active pe  unitati peptidice  pentru facilitarea transportului spre tinta. Participa P1

Fixarea pe materiale care sa asigure eliberarea treptata a componentelor active si asigurarea unei concentratii controlate a acestora. Participa P1

Reluarea unor sinteze de combinatii organometalice si coordinative pentru confirmarea sau elucidarea unor mecanisme de actiune. Participa P1

II.2.Studiul structural si cinetic al fixarii componentelor active pe materialele suport

Caracterizarea structurala prin metode specifice (RMN, IR, UV-Vis, MS) atat in solutie cat si in stare solida. Participa P3

Evaluarea gradului de fixare si studiul in timp al legarii componentei active de materialul suport specific, folosind metode uzuale (RMN la temperatura variabila, IR, UV-Vis). Participa P3

II.3.Studiul mecanismului de fixare a componentei active pe suport in stare lichida.

Realizarea unui model de solvatare a componentei fixate pe suport. Calcule de dinamica moleculara.  Participa P2

Studiul mecanismului de legare a componentei active pe materialele suport si unitatile peptidice, atat in faza gazoasa cat si in solutie, prin calcule ONIOM si dinamica moleculara. Partener P2

II.4.Validarea modelului matematic prin metode numerice

Efectuarea unor studii de caz pe sisteme concrete in vederea validarii modelului numeric privind transferul controlat al componentului activ in mediul biologic. Se tine cont de caracteristicile fizico-chimice ale compusului cu activitate biologica si ale mediului de difuzie. Schimb de experienta cu specialist de la UPS Toulouse, Universitatea din Porto, etc. Participa P9

II.5.Studiul metaloproteazelor secretate de celule, responsabile de lezarea si modelarea matricei extracelulare

Evaluarea zimografica a modularii (downregularii) expresiei metaloproteazelor, in principal a celor din familia metaloproteinazelor matriceale cu ajutorul electroforezei in geluri de poliacrilamida. Participa P6.

II.6.Elaborarea de markeri  de radio-chimioterapie specifici in vederea personalizarii chimioterapiei cu medicamente pe baza de metale

Corelarea datelor furnizate de P3, P4 si P5, referitoare la aductii metalelor cu moleculele celulelor tumorale si normale tratate cu compusi metalici, cu rezultatele in tratamentele standard. Partener P7.

II.7.Continuarea studiilor cronobiologice asupra substantelor biologic active fixate pe suport – obiectiv general 2011.

Administrare substante sintetizate in vivo. Partener P8

Urmarirea activitatii biologice a substantelor administrate subiectilor. Partener P8

Efectuarea analizelor de specialitate. Partener P8

Centralizare rezultate. Prelucrarea statistica a datelor. Partener P8

II.8. Diseminarea rezultatelor 
obtinute

Centralizarea rezultatelor stiintifice obtinute. Analiza compatibilitatii intre rezultatele obtinute. Participa toti partenerii.

Realizarea unei mese rotunde cu toti partenerii implicati in actiune. Se prevede achizitionarea de consumabile,  imprimarea de postere, chirie sala, protocol si altele specifice tipului de activitate. Participa toti partenerii.

Participarea la congrese si conferinte internationale de prestigiu in domeniul temei de cercetare. De exemplu: Participare la Congresul ESTRO 30 – European Society for Therapeutic Radiology and Oncology (locatie si data inca neprecizate).

Participarea la a 15-a Conferinta de Chimie Biologica Anorganica(ICBIC 15),Vancouver, Canada,7-12 august 2011

Se are in vedere participarea la cele mai reprezentative manifestari stiintifice in domeniul temei propuse (pana in acest moment nu se cunoaste data si locul exact pentru toate).

Participa toti partenerii.

II.9.Achizitionarea echipamentelor
 / materialelor si consumabilelor 
necesare realizarii etapei de 
activitati finale 2011

Partener P1: achizitionarea chimicale, sticlarie, materiale de laborator, solventi organici uzuali/deuterati, obiecte de papetarie, birotica , piese de schimb pentru aparatura de laborator si a materialelor de intretinere a acestora.

Partener P3: achizitionarea de consumabile specifice metodelor de caracterizare folosite, precum si upgrade-ul/intretinerea aparatelor.

Partener P2: Achizitionarea de consumabile necesare desfasurarii proiectului (papetarie, tonere, mijloace de stocare electronica, etc).

Partener P9: plata taxelor de licenta anuala pentru programele utilizate si achizitia altora noi cu performante marite daca este necesar, achizitionarea materialele consumabile necesare realizarii obiectivului.

Partener P6: achizitionare de sisteme de electroforeza cu accesorii, soft de analiza, sistem de vizualizare, kituri cu anticorpi MMP marcati fluorescent, reactivi si consumabile laborator.

Partener P7:achizitionarea de tehnica de calcul, softuri de analiza, anticorpi marcati fluorescent, anticorpi monoclonali stimulanti si izotipii respectivi GITR-Fc, izotip-Fc reactivi pentru testare in vitro

Partener P8: achizitionarea materialelor necesare pentru intretinerea biobazei si achizitionarea de materiale consumabile (birotica, papetarie).